AEG 618K 8 Manual do Utilizador

HIV-1 Resistenzentwicklungnach Einsatz antiretroviraler Medikamentenregime zurPrävention der Mutter-Kind-Übertragung von HIV in Uganda und TansaniaDis

10Resistenzlage am Anfang der Schwangerschaft gestellt und unter Beobachtung der Entwicklung dieser Parameter alle zwei Monate bei Bedarf korrigiert.

·²±«®-¬«¼§ò̸»®»º±®»ô-·²½»ßÆÌ®»¿¼·´§½®±--»-¬¸»°´¿½»²¬¿Åìç÷¬·-®¿¬¸»®½±²½»·ª¿¾´»¬¸¿¬¬¸»½¸·´¼·-¿¬´»¿-¬¿´-±°®±¬»½¬»¼¾§°®»ó¿²¼°±-¬ó»¨°±-«®»°®±°¸§´¿¨·-¬¸¿²

îðïðÅïëÃòر©»ª»®ô¾»§±²¼¬¸¿¬ØßßÎÌ-¸±«´¼¾»½±²-·¼»®»¼´·º»´±²¹¿²¼²±¬¾»-¬±°°»¼¿º¬»®¼»´·ª»®§ô¿-¼·-½±²¬·²«¿¬·±²·²½®»¿-»-¬¸»®·-µ±ºº«¬«®»¬®»¿¬³»²¬º¿·´«®»©¸»²®»

íèòÛ¿-¬³¿²ÐÍô͸¿°·®±ÜÛôݱ±³¾-ÎÉôÚ®»²µ»´ÔÓôӽ͸»®®§ÙÜô»¬¿´òøïççè÷Ó¿¬»®²¿´ª·®¿´¹»²±¬§°·½¦·¼±ª«¼·²»®»-·-¬¿²½»¿²¼·²º®»¯«»²¬º¿·´«®»±º¦·¼±ª«¼·²»¬¸»®¿°§¬±°®»

ManuskriptVI Ergebnisse 1Drug-resistantHIV-1incellularDNAofTanzanianwomenfollowingWHO-recommendedantiretroviralprophylaxisforverticaltransmissionAndre

ManuskriptVI Ergebnisse 2MethodsHIV-1infectedtreatment-naive,pregnantTanzanianwomenwererecruitedwithinanobservationalstudyatKyelaDistrictHospital(KDH)

ManuskriptVI Ergebnisse 3(89%)women.Viralloadwasreducedtoamedianof1,747copies/mlplasma(IQR1,265-5,649)atweek1-2andincreasedagainto15,123copies/mlplasm

ManuskriptVI Ergebnisse 4administrationafterintakeofNVP-SDwasfrequentlyshownforplasmavirus[12]andseemstoapplyalsoforresistanceincell-associatedHIV-DNA

ManuskriptVI Ergebnisse 5PersistenceofresistanceinHIV-DNAofPBMCsmaynegativelyimpactsubsequentmaternalAZT-containingtreatment.Hence,inthecontextofresis

ManuskriptVI Ergebnisse 6Table 1:DrugresistantHIV-variantsinplasmaandPBMCsdetectedbyASPCRProportionofresistancemutationdelivery-2weeks4-6weeks12-16wee

ManuskriptVI Ergebnisse 7051015202530PlasmaPBMCsPlasmaPBMCsPlasmaPBMCsAZTNVP3TC%p=0.7p=1.0p= 0.7p=1.0AZT(T215Y/F)AZT(K70R)NVP3TC051015202530PlasmaPBMC

11Tabelle 1: WHO PMTCT-Leitlinien von 2001, 2006 und 2010 SSW: Schwangerschaftswoche; NVP: Nevirapin; AZT: Zidovudin; 3TC: Lamivudin, LPV: Lopinavir,

ManuskriptVI Ergebnisse 8References1.ArriveE,NewellML,EkoueviDK, etal.Prevalenceofresistancetonevirapineinmothersandchildrenaftersingle-doseexposureto

ManuskriptVI Ergebnisse 911.LoubserS,BalfeP,ShermanG,HammerS,KuhnL&MorrisL.DecayofK103NmutantsincellularDNAandplasmaRNAaftersingle-dosenevirapinet

ManuskriptVI Ergebnisse10supplementarymaterial:QuantificationofHIVproviralDNAProviralDNAcopieswerequantifiedinDNAextractedfrombuffycoatbyTaqManreal-ti

ManuskriptVI Ergebnisse1150µlwith12.5 µlgenomicDNAand(B)thecyclenumberinthesecondroundPCRwasreducedto20cycles.Theresultofthepre-treatmentsamplewasused

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

12Die antiretroviralen Medikamente, die bis 2006 von der WHO zur Transmissionsprophylaxe vorgesehen waren (Tabelle 1), sind plazentagängige Reverse-

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

Manuskript VII Ergebnisse

13ressourcenschwachen Endemiegebiete, der Zugang zu antiretroviralen Medikamenten unterschiedlicher Wirkstoffklassen ist meist noch stark eingeschränk

14Abbildung 2: Resistenzmutationen, selektiert durch die Medikamente Zidovudin, Lamivudin und Nevirapin, geändert aus Johnson et al. 2011 [78] AZT

153TC (Lamivudin, Dideoxy-Thiacytidin, Handelsname Epivir®) Für 3TC ist die genetische Barriere zur Resistenzentstehung gering. Bereits eine einzige

16Asien [94]. Das SPREAD (Strategy to Control the Spread of HIV-1) Programm ermittelte sogar eine Prävalenz von 8,4% für 20 europäische Staaten und Is

17Algorithmen identifiziert und bewertet werden. Die Vorhersagetools basieren auf Regeln, die entweder auf aktuellen Literaturdaten d.h. wissensbasier

182Zielsetzung Zur Prävention der Mutter-Kind Übertragung von HIV-1 (prevention of mother-to-child transmission of HIV-1; PMTCT) in der weltweit meis

19AZT/3TC/NVP-selektierte Schlüsselmutationen (AZT: K70R, T215Y, T215F; 3TC: M184V; NVP: K103N, Y181C) der RT vorgesehen. Da die ASPCR jedoch auf die

2Die Dissertation wurde am Institut für Tropenmedizin und Internationale Gesundheit, Charité – Universitätsmedizin Berlin in der Arbeitsgruppe HIV/AID

203Ergebnisse3.1Liste aller Einzelarbeiten Manuskript IDetection and quantification of minor human immunodeficiency virus type 1 variants harboring K

21Manuskript VIDrug-resistant HIV-1 in cellular DNA of Tanzanian women following WHO-recommended antiretroviral prophylaxis for vertical transmission

223.3Manuskript I Detection and quantification of minor human immunodeficiency virus type 1 variants harboring K103N and Y181C resistance mutations i

233.4Manuskript II Emergence and persistence of minor drug-resistant HIV-1 variants in Ugandan women after nevirapine single-dose prophylaxis Abstract

243.5Manuskript III Dynamics of NVP-resistance development in HIV-1 of Ugandan mother-child pairs during 18 months after nevirapine single-dose exp

253.6Manuskript IV Minor drug-resistant HIV type-1 variants in breast milk and plasma of HIV type-1-infected Ugandan women after nevirapine

263.7Manuskript V Emergence of minor drug-resistant HIV-1 variants after triple antiretroviral prophylaxis for prevention of vertical HIV-

273.8Manuskript VI Drug-resistant HIV-1 in cellular DNA of Tanzanian women following WHO-recommended antiretroviral prophylaxis for vertical

283.9Manuskript VII Minor drug-resistant HIV-1 variants in Tanzanian women after antiretroviral prophylaxis for vertical transmission detecte

294DiskussionDie zeitlich begrenzte Einnahme antiretroviraler Medikamentenregime zur Prävention der Mutter-Kind Übertragung von HIV birgt die Gefahr d

3Inhaltsverzeichnis1 Einleitung ... 5 1.1 Die

304.1Vergleich von ASPCR und UDS Sensitive Resistenz-Nachweismethoden erlauben eine präzise Detektion von geringsten Anteilen an resistenten Virusvari

312) Aufgrund der hohen Variabilität der HIV-Sequenzen kommt es bei der ASPCR zu den bekannten Limitierungen der PCR- basierten HIV-Diagnostik: Viruss

32Assay etabliert werden musste, wurden in der vorliegenden Arbeit einzelne medikamentenselektierte Schlüsselmutationen in der RT als Marker ausgewähl

33erfolgreich, die Viruslasten größer als 20.000 Kopien/ml aufwiesen. Die Gründe hierfür wurden ausführlich in Manuskript VII diskutiert. Die ASPCR is

344.2Vergleich der HIV-Resistenzentstehung nach Einsatz zweier antiretroviraler Medikamentenregime zur Prävention der HIV-Transmission 4.2.1 HIV-Resis

35Die präpartale AZT-Einnahme führte zu einer signifikanten Abnahme der Viruslast zur Geburt, nicht aber zu einer Senkung unter die Nachweisgrenze. Vi

364.2.2 Mögliche Auswirkungen der HIV-Resistenzentstehung für den Erfolg anschließender antiretroviraler Therapien Ohne medikamentösen Selektionsdruck

37Insgesamt wiesen die Ergebnisse der vorliegenden Arbeit sowohl nach NVP-Einmaldosis als auch nach Einnahme des Dreifachregimes auf eine Persistenz v

384.2.3 Mögliche Auswirkungen der HIV-Resistenzentstehung für die vertikale Transmission von HIV Die Einführung der präpartalen AZT-Einnahme im Dreifa

394.2.4HIV-Resistenzentstehung bei vertikal infizierten Kindern Das Auftreten von Resistenzen konnte auch bei den HIV-infizierten Kindern nach Einnah

43.7 Manuskript V -Abstract ... 26 Emergence of min

40Beginn der Langzeittherapien im Infektionsverlauf. Eine der empfohlenen Prophylaxeoptionen entspricht dem Medikamenten-Einnahmeschema von 2006 mit d

41Die Verbreitung und Transmission resistenter Viruspopulationen gewinnt in Afrika zunehmend an Bedeutung. Eine Studie aus Mwanza, Tanzania ermittelte

425 Literatur 1. Barre-Sinoussi F, Chermann JC, Rey F, Nugeyre MT, Chamaret S, et al. (1983) Isolation of a T-lymphotropic retrovirus from a patient a

4313. Joint United Nations Program on HIV/AIDS (UNAIDS) (2010) Global Report: UNAIDS report on the global AIDS epidemic 2010.Available: http://www.una

4427. Plantier JC, Leoz M, Dickerson JE, De Oliveira F, Cordonnier F, et al. (2009) A new human immunodeficiency virus derived from gorillas. Nat Med

4542. Deutschen AIDS-Gesellschaft e.V./Österreichische AIDS-Gesellschaft (2010) Deutsch-Österreichische Leitlinien zur antiretroviralen Therapie der H

4655. Petra Study T (2002) Efficacy of three short-course regimens of zidovudine and lamivudine in preventing early and late transmission of HIV-1 fro

4766. McIntyre JA, Hopley M, Moodley D, Eklund M, Gray GE, et al. (2009) Efficacy of short-course AZT plus 3TC to reduce nevirapine resistance in the

4880. Marcelin AG, Delaugerre C, Wirden M, Viegas P, Simon A, et al. (2004) Thymidine analogue reverse transcriptase inhibitors resistance mutations p

4994. Frentz D, Boucher CA, van de Vijver DA. (2012) Temporal changes in the epidemiology of transmission of drug-resistant HIV-1 across the world. Ai

51 Einleitung 1.1Die humanen Immundefizienzviren Die humanen Immundefizienzviren (HIV) vom Typ-1 (HIV-1) und Typ-2 (HIV-2) wurden 1983 und 1986 [1,

50107. Siliciano JD, Kajdas J, Finzi D, Quinn TC, Chadwick K, et al. (2003) Long-term follow-up studies confirm the stability of the latent reservoir

51121. Halvas EK, Aldrovandi GM, Balfe P, Beck IA, Boltz VF, et al. (2006) Blinded, multicenter comparison of methods to detect a drug-resistant mutan

52135. Lallemant M, Ngo-Giang-Huong N, Jourdain G, Traisaithit P, Cressey TR, et al. PHPT-4 Study Team. (2010) Efficacy and safety of 1-month postpart

53148. Pellegrin I, Garrigue I, Caumont A, Pellegrin JL, Merel P, et al. (2001) Persistence of zidovudine-resistance mutations in HIV-1 isolates from

54162. De Vincenzi, I. and Kesho Bora Study Group. (2009) Triple-antiretroviral (ARV) prophylaxis during pregnancyand breastfeeding compared to short-

556ZusammenfassungSubsahara-Afrika ist die weltweit am stärksten betroffene Region von HIV/AIDS. Im Jahr 2010 entfielen ca. 68% aller HIV-Infektionen

56resistente Viruspopulationen inklusive minoritärer Varianten in Plasma- und/oder Brustmilchproben von 39 HIV-positiven Müttern und deren vertikal in

57von Therapien, die innerhalb des ersten Jahres nach Transmissionsprophylaxe begonnen werden, einschränken. Während die Entstehung monoresistenter Vi

587AbstractSub-Saharan Africa represents the most heavily HIV-affected region worldwide. In 2010 this region accounted for approximately 68% of all HI

59prophylaxis (study cohort: Southwest Tanzania, 2008-2009). A highly sensitive allele-specific PCR (ASPCR) specific for the most prevalent subtypes A

6weltweit insgesamt 34 Millionen Menschen mit HIV infiziert, die Zahl der Neuinfektionen lag bei 2,7 Millionen in jenem Jahr. Im globalen Vergleich is

608 Liste der veröffentlichten Arbeiten Hauser A, Mugenyi K, Kabasinguzi R, Bluethgen K, Kuecherer C, Harms G, Kunz A. Detection and quantification of

619Anhang 9.1DanksagungAn dieser Stelle möchte ich mich bei all denen bedanken, die mich fachlich und moralisch in dieser Zeit unterstützt haben. Fr

62Fragen, nahm sich die Zeit, sich in diese hineinzudenken und gab wertvolle Anregungen. Ein Austausch mit ihr war stets bereichernd und gab mir Siche

639.2LebenslaufDer Lebenslauf ist in der Online-Version aus Gründen des Datenschutzes nicht enthalten. Anhang

ßÒÌ×Ó×ÝÎÑÞ×ßÔ ßÙÛÒÌÍßÒÜ ÝØÛÓÑÌØÛÎßÐÇôÖ«´§îððçô°òîçêëŠîçéíʱ´òëíôÒ±òéððêêóìèðìñðçñüðèòðð ð¼±·æïðòïïîèñßßÝòðïêéîóðèݱ°§®·¹¸¬wîððçôß³»®·½¿²Í±½·»¬§º±®Ó·½®

 ̸»¼»¬»½¬·±²´·³·¬±ºØ×ÊÎÒß·²°´¿-³¿-¿³ó°´»-©¿-¼»¬»®³·²»¼¾§«-·²¹-»®·¿´¼·´«¬·±²-±ºØ×Êó²»¹¿¬·ª»¸«³¿²°´¿-³¿Ì±¯«¿

 ̸»±«¬»®ÎÌóÐÝΩ¿-¼·´«¬»¼ïæïôððð·²ë³ÓÌ®·-óØÝ´¾«ºº»®ô°Øèòß°°®±¨·³¿¬»´§ïð謱ïðç½±°·»-ñ®»¿½¬·±²ø¯«¿²¬·¬¿¬»¼¾

 ̸»³·²·³«³·²°«¬±ºØ×ÊÎÒß®»¯«·®»¼¬±¿³°´·º§®»°®±¼«½·¾´§©¿-ïôððð½±°·»-°»®ÎÌóÐÝÎòß´´î𬸻±«¬»®ÎÌóÐÝÎø³»¼·¿²ª·®¿´´±¿¼ôïîôçíë½±°·»-ñ³´å·²¬»®ó¯

½±®¼¿²¬´§-¸±©»¼±²´§©·´¼ó¬§°»ª·®«-ø² íëå¹®±«°ß÷øÌ¿ó¾´»ì÷òßÍÐÝο--¿§-ø² èå¹®±«°Þ÷øÌ¿¾´»ì÷òÞ±¬¸½«¬±ºº-ô¬¸»-¬¿²¼¿®¼ó®»´¿¬»¼½«¬±ºº¿-©»´´¿-¬¸»°¿óº±®¬¸»°®»-»

ÌßÞÔÛ ìò λ-«´¬- ±º ¬¸» ßÍÐÝÎ ¿--¿§- ¿²¼ ¬¸» °±°«´¿¬·±²ó¾¿-»¼ -»¯«»²½·²¹ ±º °´¿-³¿ -¿³°´»- ½±´´»½¬»¼ º®±³ îð Ø×Ê󷲺»½¬»¼ ˹¿²¼¿² ©±³»² ï ¬± ê ©»»µ- ¿

7„horizontale Transmission“ dar. Die Übertragung von HIV-1 von der Mutter auf das Kind wird als „vertikale Transmission“ bezeichnet. Ohne medizinische

¿²¼·²ëñîðøîëû÷©±³»²ô®»-°»½¬·ª»´§òб°«´¿¬·±²ó¾¿-»¼-»ó¯«»²½·²¹®»ª»¿´»¼²±ÒÊÐó¿--±½·¿¬»¼³«¬¿¬·±²-¾«¬¿²¿¼¼·ó¬·±²¿´°±´§³±®°¸·-³©·¬¸·²¬¸»´¿-¬º±«®²«½´»±¬·¼»-±

¬¸¿²ß¿²¼Üô°®·³»®-¿²¼ÐÝν±²¼·¬·±²-¸¿ª»¬±¾»¼»ó-·¹²»¼ª»®§½¿®»º«´´§¼«»¬±¬¸»·²¸»®»²¬ª«´²»®¿¾·´·¬§±ºßÍÐÝο--¿§-¬±°±´§³±®°¸·-³-ò̸»-»-»²-·¬·ª»³»¬¸±¼-½¿²¾»«-»

 îððçòÓ·²±®·¬§¯«¿-·-°»½·»-±º¼®«¹ó®»-·-¬¿²¬Ø×Êóטּ¿¬´»¿¼¬±»¿®´§¬¸»®¿°§º¿·´«®»·²¬®»¿¬³»²¬ó²¿·ª»¿²¼ó¿¼¸»®»²¬°¿¬·»²¬-òÝ

Û³»®¹»²½»¿²¼Ð»®-·-¬»²½»±ºÓ·²±®Ü®«¹óλ-·-¬¿²¬Ø×ÊóïÊ¿®·¿²¬-·²Ë¹¿²¼¿²É±³»²¿º¬»®Ò»ª·®¿°·²»Í·²¹´»óܱ-»Ð®±°¸§´¿¨·-ß²¼®»¿Ø¿«-»®ïôîôÕ·¦·¬±Ó«¹»²§·íôα-»Õ¿¾¿-·²

Ó»¬¸±¼-Û¬¸·½-ͬ¿¬»³»²¬ß´´-¬«¼§°¿®¬·½·°¿²¬-©»®»Ø×Êóï°±-·¬·ª»°®»¹²¿²¬©±³»²»²®±´´»¼·²¿°®»ª»²¬·±²±º³±¬¸»®ó¬±ó½¸·´¼øÐÓÌÝÌ÷°®±¹®¿³³»¿¬Ú±®¬Ð±®¬¿´Ü·-¬®·½¬Ø±-°

®»-·-¬¿²¬ª¿®·¿²¬-¿¬°®±°±®¬·±²-´±©»®¬¸¿²ëû·²¬¸»ßÍÐÝΩ»®»½´¿--·º·»¼¬±½±²¬¿·²Ø×Êóï©·´¼¬§°»±²´§¾§°±°«´¿¬·±²-»¯«»²½·²¹òײ¿´´-¿³°´»-¸¿®¾±«®·²¹ÒÊÐó®»-·-¬¿²¬ª

©±³»²Åïèé»®»-«ºº·½·»²¬´§¸·¹¸¬±°®»ª»²¬¿¾®»¿µ¬¸®±«¹¸±º®»-·-¬¿²¬ª·®«-¿¬¬¸·-»¿®´§¬·³»òØ·¹¸»®®¿¬»-±ºÒÊÐó¿--±½·¿¬»¼®»-·-¬¿²½»³«¬¿¬·±²-·²Ø×Êóï-«¾¬§°»Ü-¬®¿·²

Ò»ª·®¿°·²»æßÓ«´¬·ó½±«²¬®§ôЮ±-°»½¬·ª»Ý±¸±®¬Í¬«¼§òÐÔ±ÍÓ»¼éæ»ïðððîííòçòÖ±«®¼¿·²ÙôÒ¹±óÙ·¿²¹óØ«±²¹ÒôԻݱ»«®ÍôÞ±©±²©¿¬¿²«©±²¹ÝôÕ¿²¬·°±²¹Ðô»¬¿´òøîððì÷ײ¬®¿°

ManuskriptIII Ergebnisse1DynamicsofNVP-resistancedevelopmentinHIV-1ofUgandanmother-childpairsduring18monthsafternevirapinesingle-doseexposuretoreducev

ManuskriptIII Ergebnisse2Sequencingmethod[10]oronsamplestaken4-12weeksafterbirthoraftertreatmentfailure[8,15,16].Sofar,theemergenceandpersistenceofmin

81.2Antiretrovirale Medikamente gegen HIV Seit 1987 können HIV-Infizierte mit antiretroviralen Medikamenten behandelt werden. Ziel ist die Hemmung der

ManuskriptIII Ergebnisse3months(incaseofdeathorlosstofollow-upofthechild),HIV-PCRwasperformedusingthe “outer” PCRofASPCR[21].IncaseofpositivePCR-resul

ManuskriptIII Ergebnisse4notbeidentified,sincesamplesofbirthand/or2-4weeksafterwerelacking.AllHIV-positiveinfantswerebreastfed.Mother-childpairswerein

ManuskriptIII Ergebnisse5Forchildrenwithantenatalinfections,differentdynamicmodelsofNVP-resistancedevelopmentwerediscussedby[29]Micek etal:ahighpropor

ManuskriptIII Ergebnisse6challenging:ourdata(despitetheverysmallsamplesize)anddataofPersaud etal. [34](26%ofchildren(n=19)withNVP-resistantHIV6monthsa

ManuskriptIII Ergebnisse7References1.GuayLA,MusokeP,FlemingT,BagendaD,AllenM,etal.(1999)Intrapartumandneonatalsingle-dosenevirapinecomparedwithzidovud

ManuskriptIII Ergebnisse813.RowleyCF,BoutwellCL,LeeEJ,MacLeodIJ,RibaudoHJ,etal.(2010)Ultrasensitivedetectionofminordrug-resistantvariantsforHIVafterne

ManuskriptIII Ergebnisse926.GaleCV,YirrellDL,CampbellE,VanderPaalL,GrosskurthH,etal.(2006)GenotypicvariationinthepolgeneofHIVtype1inanantiretroviraltr

No. Trans-missionSub-type Delivery Week 2-4 Week 6-8 Month 3 Month 6 Month 12 Month 18 K103N Y181C K103N Y181C K103N Y181C K103N Y181C

wîðïï ײ¬»®²¿¬·±²¿´ Ó»¼·½¿´ Ю»-- ïíëçóêëíë ø°®·²¬÷ îðìðóîðëè ø±²´·²»÷ ïðçß²¬·ª·®¿´ ̸»®¿°§ îðïïå ïêæïðçŠïïí ø¼±·æ ïðòíèëïñ×ÓÐïêçè÷Þ¿½µ¹®±«²¼æ Ò»ª·®¿°

wîðïï ײ¬»®²¿¬·±²¿´ Ó»¼·½¿´ Ю»--ïïð Ü Ð·´¹»® »¬ ¿´òª¿®·¿²¬- ·² °´¿-³¿ ÅïíôïìÃò λ½»²¬´§ô ¿ ¬¸·®¼ -¬«¼§ ¿²¿´§-»¼ ¾®»¿-¬ ³·´µ -¿³°´»- ±º ©±³»² ³¿·²´§

9Einbau in die DNA-Kette bei der Reversen Transkription. Da den NRTI die 3´-Hydroxylgruppe an der Desoxyribose fehlt, kann keine Phosphordiesterbindu

Ü®«¹ó®»-·-¬¿²¬ Ø×Êóï ·² ¾®»¿-¬ ³·´µ ¿²¼ °´¿-³¿ß²¬·ª·®¿´ ̸»®¿°§ ïêòï ïïïÌ¿¾´» ïò Ü® «¹ó®»-· -¬¿ ²¬ Ø×Êó ï ª¿®· ¿² ¬- ·² °´¿-³¿ ¿² ¼ ¾ ®» ¿-¬ ³·´

Ü Ð·´¹»® »¬ ¿´òwîðïï ײ¬»®²¿¬·±²¿´ Ó»¼·½¿´ Ю»--ïïî ײ ì øîïû÷ ©±³»²ô ¼®«¹ó®»-·-¬¿²¬ ª·®«- ©¿- ·¼»²¬·óø°¿¬·»²¬ ²«³¾»®- îô ìô ê ¿²¼ ïîå Ì¿¾´» ï÷ô ¬¸» ³

Ü®«¹ó®»-·-¬¿²¬ Ø×Êóï ·² ¾®»¿-¬ ³·´µ ¿²¼ °´¿-³¿ß²¬·ª·®¿´ ̸»®¿°§ ïêòï ïïí±º ˹¿²¼¿² ©±³»² ·²º»½¬»¼ ©·¬¸ Ø×Êóï ©¸± ¬±±µ ÒÊÐóÍÜò ݱ²-·¼»®·²¹ ¬¸¿¬ ¾®»¿-¬

Û³»®¹»²½»±ºÓ·²±®Ü®«¹óλ-·-¬¿²¬Ø×ÊóïÊ¿®·¿²¬-¿º¬»®Ì®·°´»ß²¬·®»¬®±ª·®¿´Ð®±°¸§´¿¨·-º±®Ð®»ª»²¬·±²±ºÊ»®¬·½¿´Ø×ÊóïÌ®¿²-³·--·±²ß²¼®»¿Ø¿«-»®ïôîöôÖ«´·«-Í»©¿²¹·í

²·¿²ÐÓÌÝ̹«·¼»´·²»-¿-°®»º»®®»¼ÐÓÌÝÌ®»¹·³»²ÅïêÃòÓ±²±¬¸»®¿°§±º¿²¬·®»¬®±ª·®¿´¼®«¹-ô¸±©»ª»®ô·²¸»®»²¬´§·²ª±´ª»-¬¸»®·-µ±º¼®«¹®»-·-¬¿²½»¼»ª»´±°³»²¬òÍ»´»½¬·±²

¬¸»²»·¹¸¾±®¶±·²·²¹³»¬¸±¼øÞ·±»¼·¬éòðòç÷ÅíêÃòØ×Êóï-«¾¬§°·²¹±º¬¸» °±´ -»¯«»²½»©¿-°»®º±®³»¼«-·²¹¬¸»ÎÛÙßØ×Êóï-«¾¬§°·²¹¬±±´ÅíéÃòͬ¿¬·-¬·½¿´¿²¿´§-·-̸»²±²ó°¿

øïìñëð÷±º¬¸»©±³»²©»®»·²º»½¬»¼©·¬¸Ø×Êóï-«¾¬§°»ßïôêèûøíìñëð÷©·¬¸-«¾¬§°»Ý¿²¼¬©±©±³»²øìû÷©·¬¸-«¾¬§°»ÜòÒ±²»±º¬¸»ëð¾¿-»´·²»-¿³°´»-»¨¸·¾·¬»¼°®»»¨·-¬·²¹¼®«¹ó-

Ú·¹«®»ïòÜ·-¬®·¾«¬·±²±º¼®«¹ó®»-·-¬¿²¬Ø×Êó謹®·¿²¬-¿º¬»®½±³°´»¨¿²¬·®»¬®±ª·®¿´°®±°¸§´¿¨·-·²ëðÌ¿²¦¿²·¿²©±³»²ò¼±·æïðòïíéïñ¶±«®²¿´ò°±²»òððíîðëëò¹ððïÌ¿¾´»íò

̸»³»¼·¿²²«³¾»®±º¼¿§-±º¿²¬»²¿¬¿´ßÆÌ·²¬¿µ»¼·¼²±¬¼·ºº»®-·¹²·º·½¿²¬´§¾»¬©»»²¬¸»º·ª»©±³»²©¸±¼·-°´¿§»¼ßÆÌ®»-·-¬¿²½»³«¬¿¬·±²¿¬¼»´·ª»®§øé鼿§-÷¿²¼¬¸»ì멱³»²©

´±©»®ÝÜì½»´´½±«²¬´»ª»´-ø³»¼·¿²æíçð½»´´-ñ³³í÷½±³°¿®»¼¬±¬¸»®»´¿¬·ª»´§·³³«²±½±³°»¬»²¬©±³»²·²±¬¸»®-¬«¼·»-ø³»¼·¿²æòëðð½»´´-ñ³³í÷ÅíèôíçÃòß¼ª¿²½»¼¼·-»¿-»-¬¿¹